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乳糖和蔗糖的液相色谱检测

 发布时间:2017-04-21 点击量:895

乳糖和蔗糖的检测

摘要:本实验根据中国药典2010版二部乳糖项下测试方法,采用液相色谱 (HPLC) 法结合示差折光检测器分离乳糖与蔗糖,并选择了4种不同类型的氨基柱对乳糖和蔗糖的保留及分离情况进行了考察。结果表明:流动相为乙腈:=75:25(v/v),使用Innoval NH2色谱柱(5 μm100Å4.6×250 mm) 对两种物质的分离度为2.44,实现了乳糖和蔗糖的良好分离,且各物质峰形良好,保留时间稳定,能够满足药典要求。

关键词:液相色谱法;示差检测器;乳糖;蔗糖;氨基柱;

前言

乳糖是一种双糖,由一分子β-D-半乳糖和一分子α-D-葡萄糖在β-14-位形成糖苷键相连,有两种端基异构体:α-乳糖和β-乳糖,在水溶液中可互相转化。α-乳糖很容易结合一分子结晶水。乳糖甜度约是蔗糖的六分之一。蔗糖容易被酸水解水解后产生等量的D-葡萄糖D-果糖,其不具有还原性。发酵形成的焦糖可以用作酱油的增色剂。乳糖作为一种药用辅料,以填充剂或稀释剂的形式广泛应用于片剂、胶囊、颗粒剂和冻干产品中。然而,一般药用乳糖来源于牛奶,可能存在可引起过敏反应的杂蛋白。因此,2010版药典增加了乳糖的检查项内容。本实验以药典为依据,实现了乳糖与蔗糖的良好分离。

实验部分

1.1 仪器、试剂与材料

1.1.1 主要仪器设备

液相色谱仪,示差检测器

1.1.2 试剂材料

超纯水;乙腈色谱纯;蔗糖和乳糖客户提供,分别加水溶解并稀释成浓度为10 mg/mL的储备溶液

色谱柱1-6:规格均为μm100Å4.6×250 mm

1.1.3 色谱条件

流动相:A-水,B-乙腈,A:B=75:25 (v/v)

流速:1.0 mL/min

柱温:室温

进样量:10 uL

2 结果与讨论

本实验对比了六种色谱柱对乳糖及蔗糖的分离效果,由表1及图1-5可知,依据2010版药典,流动相为乙腈:=75:25(v/v),柱温为室温时,采用Innoval NH2色谱柱分离效果,分离度为2.44

1. 不同氨基柱及HILIC色谱柱乳糖与蔗糖分离测试数据对比(乙腈:水=7525

色谱柱

柱温

组分名称

保留时间/min

拖尾因子

分离度

色谱图

氨基柱A

室温

乳糖

6.485

1.08

1

蔗糖

7.135

1.00

1.18

Innoval NH2

室温

乳糖

7.180

1.16

2

蔗糖

8.707

1.22

2.44

氨基柱B

室温

乳糖

8.750

1.05

3

蔗糖

10.170

1.00

2.03

氨基柱C

室温

乳糖

6.383

1.15

4

蔗糖

6.983

1.09

1.15

     

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